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Feulgen 富爾根染色是一種用于檢測 DNA 的經典染色方法,以下是其相關介紹:
基本原理
水解反應:利用 1M HCl 在 60℃下水解,使 DNA 分子中嘌呤堿基與去氧核糖之間的糖苷鍵打斷,嘌呤脫下,去氧核糖 C-1 位置釋放出醛基。
顯色反應:席夫試劑中的堿性品紅原為桃紅色,與亞硫酸作用時被氧化,醌型變為苯型,成為無色透明的 N - 亞磺酸亞硫酸副品紅堿。當與 DNA 水解產生的醛基作用時,其分子式恢復為醌型結構,呈現紫紅色。
操作步驟
取材與固定:選取合適的組織或細胞樣本,如植物根尖、動物組織切片等,常用卡諾氏固定液等進行固定,以保持細胞形態和 DNA 的完整性。
脫蠟與水化:如果是石蠟切片,需要先進行脫蠟處理,用二甲苯等試劑去除石蠟,然后依次經過不同濃度的酒精溶液進行水化,使組織回到水溶液狀態。
水解:將標本放入預熱至 60℃的 1M HCl 中水解適當時間,一般為 8-10 分鐘,水解時間需根據不同的組織類型和固定劑進行優化。
水洗:水解完成后,用自來水或蒸餾水沖洗標本,去除多余的鹽酸。
染色:加入席夫試劑,在暗處染色 30-60 分鐘,使釋放出的醛基與席夫試劑充分反應,形成紫紅色產物。
漂洗:從席夫試劑中取出標本,用亞硫酸水溶液漂洗,去除未結合的席夫試劑,一般漂洗 5-10 分鐘。
水洗:再用自來水或蒸餾水沖洗,去除殘留的亞硫酸水溶液。
脫水、透明與封片:依次用不同濃度的酒精進行脫水,然后用二甲苯等透明劑進行透明處理,最后用樹脂等封片介質將標本封片,以便于顯微鏡觀察。
2025-11-07
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