一、技術(shù)簡介：

甲苯胺藍(lán)是常用的人工合成染料的一種，屬于醌亞胺染料類，這類染料一般含有兩個(gè)發(fā)色團(tuán)，一個(gè)是胺基，一個(gè)是醌型苯環(huán)，來構(gòu)成色原顯色。染料除有發(fā)色團(tuán)外，還要有能使色原對(duì)組織及其他被染物產(chǎn)生親和力的原子團(tuán)即助色。助色團(tuán)能促使染料產(chǎn)生電離成鹽類，幫助發(fā)色團(tuán)對(duì)組織產(chǎn)生染色力，使切片上的組織細(xì)胞著色。甲苯胺藍(lán)不僅含有兩個(gè)發(fā)色團(tuán)，還含有兩個(gè)助色團(tuán)，為堿性染料，甲苯胺藍(lán)中的陽離子有染色作用，組織細(xì)胞的酸性物質(zhì)與其中的陽離子相結(jié)合而被染色。

二、實(shí)驗(yàn)步驟：

1、脫蠟

（1）70℃烤片5min；

（2）二甲苯（I）中脫蠟10 min；

（3）二甲苯（II）中脫蠟10 min；

（4）100%乙醇（I）中5 min洗去二甲苯；

（5） 100%乙醇（II）中5 min洗去二甲苯；

2、水化

（1）95%乙醇中水化1 min；

（2）85%乙醇中水化1 min；

（3）75%乙醇中水化1 min；

（4）蒸餾水中水化待用；

3、染色

（1）甲苯胺藍(lán)染色液染色30min；

（2）流水沖洗2 min；

（3）1%鹽酸酒精分化至軟骨細(xì)胞呈紫藍(lán)色清楚可見；

（4）流水沖洗切片5 min；

（5）蒸餾水過洗1-2 s；

4、脫水

（1）85%乙醇脫水1 min；

（2）95%乙醇脫水1min；

（3）無水乙醇脫水1min；

（4）無水乙醇脫水1min；

5、透明

（1）二甲苯（I）透明2 min；

（2）二甲苯（II）再次透明2min；

6、封片、鏡檢

在石蠟切片的中央滴加一滴中性樹膠，蓋上蓋玻片封固，顯微鏡下觀察拍照。

三、結(jié)果判讀：

肥大細(xì)胞、尼氏體呈藍(lán)色。

四、注意事項(xiàng)：

1、注意軟骨和背景的分化程度;

2、注意甲苯胺藍(lán)染液的效價(jià)，及時(shí)更換染液

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