免疫熒光染色

1、用PBS輕洗組織載玻片兩次，切記輕緩，防止切片從載玻片上脫落，必要時(shí)靜泡去除OCT膠即可；

2、固定：加入4%PFA固定20min；

3、破膜：0.3% TritonX-100/PBS 破膜30min；

4、封閉：加入blocking buffer ,置于室溫下1h；

5、一抗孵育：加入一抗，在4度孵育過(guò)夜或在室溫孵育3h；用PBS輕緩清洗一抗 3 次，10min/次；

6、二抗孵育：加入二抗，室溫孵育1h；用PBS輕緩清洗二抗3 次，10min/次；

7、DAPI 染色：加入DAPI溶液，室溫5min；用PBS清洗DAPI 3 次，10min/次；

8、封片：在載玻片上滴加封閉液，覆上蓋玻片，注意趕走氣泡，用指甲油封片；

9、熒光顯微鏡下拍片。

H & E 染色

1. 準(zhǔn)備：將生理鹽水濕潤(rùn)的紗布放置在培養(yǎng)皿上，培養(yǎng)皿放置在冰上；

2. 取材：快速取下肌肉標(biāo)本，將其放置在紗布上；

3. 標(biāo)本處理：將肌肉標(biāo)本浸入經(jīng)液氮預(yù)冷的異戊烷內(nèi)30-60s，處理后的肌肉標(biāo)本放入液氮中保存；

4. 凍切片：肌肉標(biāo)本切片厚度10um，將其貼在載玻片上，-20℃保存；

（注意：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中避免肌肉標(biāo)本凍融）

5.蘇木素染1 min（染液回收）——水洗；

6.1%伊紅染1 min（染液回收）——水洗；

7.80%酒精——90%酒精——100%酒精——100%酒精—— 二甲苯

8.樹(shù)膠封片。

尼氏染色

1、冰凍切片一定要在室溫下干燥至少1小時(shí)，否則在后續(xù)步驟中容易脫片；

2、slice置于雙蒸水中，靜置2min;

3、slice浸入nissl染液中，于37度孵育30min，切片越厚，孵育時(shí)間宜延長(zhǎng)；

4、染液孵育結(jié)束后，蒸餾水浸洗2次，每次數(shù)秒；

5、將slice依次浸入95%乙醇2 次，2min/次，二甲苯中透明2 次，5 min/次；

6、中性樹(shù)膠封片。

注意：千萬(wàn)不要等到二甲苯干了再封片，否則，組織會(huì)變成棕黑色；未干情況下封片還可幫助稀釋中性樹(shù)膠，減少氣泡。

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